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ELISA試劑盒嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮鬟^(guò)程,得出準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果
點(diǎn)擊次數(shù):795 更新時(shí)間:2019-03-04
  ELISA試劑盒嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮鬟^(guò)程,得出準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果
  ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或者抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。同時(shí)結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體任然能夠保證其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。同時(shí)因?yàn)槊傅拇呋l率很高,所以極大的放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
  ELISA試劑盒的測(cè)試模式比較常見(jiàn)的有雙抗體夾心法,具體的測(cè)定方法如下:
  1、首先用雙抗體之一在2-8℃的碳酸鹽緩沖液中過(guò)夜浸泡,形成固相抗體,洗滌去除沒(méi)有和固相結(jié)合或者結(jié)合的不牢固的抗體之后,用小牛血清或者牛血清白蛋白等封閉,洗滌去除未結(jié)合的部分和雜質(zhì)。
  2、加入需要測(cè)定的臨床樣本,溫育一定時(shí)間。等待需要測(cè)定的抗原就會(huì)和固相上特異抗體結(jié)合而吸附在固相上。
  3、加入酶標(biāo)記的雙抗體之二,溫育一定時(shí)間。在固相上會(huì)形成雙抗體與特異抗原的夾心產(chǎn)物。
  4、加入酶底物,溫育顯色測(cè)定。
  ELISA試劑盒的這一方法我們有兩步溫育的步驟,我們平常稱之為“兩步法”,現(xiàn)在為了簡(jiǎn)化操作步驟,很多推出了“一步法”試劑盒,也就是將上述的2和3合并為了一步,但是雖然一步法相比兩步法操作簡(jiǎn)單,但是也有他的缺陷,容易造成勾狀效應(yīng),出現(xiàn)假陰性或定量偏低的結(jié)果。
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