日本亚洲洲精品码无无专区,丰满人妻熟妇乱又伦精品软件 ,妻子的秘密免费读全文,夜夜精品无码一区二区三区

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁(yè) > 技術(shù)與支持 > 引物的合成及純化方式
引物的合成及純化方式
點(diǎn)擊次數(shù):1575 更新時(shí)間:2022-10-24

  目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺y三酯法。該方法具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。主要是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成,由待合成引物的3'端向5'端合成延伸,相鄰的核苷酸通過(guò)3'→5'磷酸二酯鍵連接。

固相亞磷酰胺三酯法合成引物的具體步驟如下:

1) 用三lv乙酸去除固相載體5'-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT,獲得游離的5'-羥基;

2) 將亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體與活化劑四氮唑混合,得到核苷亞磷酸活化中間體,與游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng);

3) 由于無(wú)法*的5'-羥基都參與縮合,可能有極少數(shù)5'-羥基沒(méi)有參加反應(yīng)(少于2%),可用乙酸酐和1-甲基咪唑試劑將其終止合成,這種短片段可以在純化時(shí)分離掉;

4) 在氧化劑的作用下,亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯,使DNA磷酸骨架更穩(wěn)定。

經(jīng)過(guò)以上四個(gè)步驟,一個(gè)脫氧核苷酸就被連接到固相載體上。重復(fù)以上步驟,直到所有要求合成的堿基連接完成。合成過(guò)程中可以監(jiān)控脫下的保護(hù)基團(tuán)DMT的顏色可以初步判定合成效率。

引物純化方式選擇:

1、C18柱脫鹽:

有人稱(chēng)其為簡(jiǎn)易反相柱,它對(duì)DNA有特異性的吸附,可以被有機(jī)溶解洗脫,但不會(huì)被水洗脫,所以能有效地去除鹽分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。實(shí)際上,它是一種脫鹽的作用。這種方法一般不會(huì)對(duì)普通PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。對(duì)于需要用于測(cè)序、克隆的引物不能使用這個(gè)級(jí)別。
2、OPC純化: 

OPC純化是根據(jù)DNA保護(hù)基(DMTr基)和Cartridge柱中樹(shù)脂間的親合力作用的原理進(jìn)行純化目的DNA片段。OPC法純化的DNA純度大于95%。適用于40mer以下引物的純化。
3、PAGE純:

PAGE純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,對(duì)DNA片段進(jìn)行分離,然后從凝膠中回收目的DNA的方法。PAGE純化法也是一種非常有效的DNA純化方法,純化后的DNA純度大于95%,對(duì)長(zhǎng)鏈Oligo DNA (大于50mer)的純化特別有效。
4、HPLC純化:

HPLC純化是使用高效液相色譜的原理,對(duì)DNA片段進(jìn)行純化。純度可以大于99%。主要用于短鏈和修飾引物的純化。該法的弱點(diǎn)是成本較高,批量效率不高。

国产精品亚洲第一区在线观看| 母亲韩剧国语版免费观看中文| 亚洲娇小与黑人巨大交| 女女车车的车车视频免费| 中文字幕人妻丝袜乱一区三区| 竹菊成AV人无码亚洲成AV无码 | 凹凸国产熟女精品视频app| 国产精品第一页| 一本大道无码人妻精品专区| 国产AV国片偷人妻麻豆| 97无码欧美熟妇人妻蜜桃天美| 国产精品女人呻吟在线观看| 精品少妇爆乳无码AV无码专区| 国产片和外国大片| 久久久久久久久久久| 免费无码VA一区二区三区| 国产一区二区波多野结衣| 羞羞答答麻豆国产免费观看 | 日本乱偷互换人妻中文字幕| 欧美最猛黑人XXXXX猛交 | 国产成人无码综合亚洲日韩| 亚洲色丰满少妇高潮18p| 成av人片一区二区三区久久| 国产亚洲精品久久久久久禁果TV| 国产精品久久久久久久| 国产亚洲精品久久久999蜜臀| 亚洲av无码国产在丝袜线观看| 亚洲精品无码永久在线观看男男| 美女黄网站成人免费视频| 中文字幕乱码中文乱码51精品| 国产精品 高清 尿 小便 嘘嘘| 日韩乱码人妻无码系列中文字幕| 男女男精品免费视频网站| 国产AV国产AV在在免费线| 性久久久| 亚洲一区二区三区在线观看网站| 无码夜色一区二区三区| 办公室欧美大尺寸SUV| 国产偷窥熟女精品视频大全| 免费无遮挡无码永久视频 | 亚洲国产成人精品无码区在线|