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RT-PCR試劑盒兩種測(cè)量方法的優(yōu)缺點(diǎn)介紹
點(diǎn)擊次數(shù):760 更新時(shí)間:2022-12-26
   RT-PCR試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
 
  應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
 
  在RT-PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)中,用直接法測(cè)定抗體,不能直接用酶符號(hào)測(cè)定抗體,然后直接加入底物。而要加酶標(biāo)抗抗體呢?
 
  如果將酶符號(hào)應(yīng)用于待測(cè)抗體,直接法比經(jīng)典法更復(fù)雜,在探索符號(hào)條件時(shí),不能保證抗體因誤操作而失活;酶標(biāo)二抗目前已較為常見(jiàn),被規(guī)模化,購(gòu)買(mǎi)后使用方便。如果你直接做好了,方法已經(jīng)優(yōu)化了,d一抗二抗顯色,總時(shí)間加起來(lái),結(jié)果不會(huì)超過(guò)2到3小時(shí)。
 
  RT-PCR試劑盒可以使用直接ELISA法,即抗體包板用來(lái)在抗原上標(biāo)記酶,然后顯色,這與直接方法相比,減少了一步的時(shí)間,縮短了時(shí)間。然而直接法和直接ELISA法各有優(yōu)缺點(diǎn),其要求取決于實(shí)驗(yàn)的具體要求。
 
  1、要檢測(cè)的抗體通常是免疫后產(chǎn)生的抗體。其中有免疫功能衰竭、抗體過(guò)少等因素存在。酶符號(hào)的使用存在許多不確定因素,如在使用酶符號(hào)之前無(wú)法測(cè)量效價(jià)的可能性,這會(huì)導(dǎo)致不必要的混淆。
 
  2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)中酶聯(lián)抗體與抗體結(jié)合后,ELISA試劑盒具有很強(qiáng)的信號(hào)放大作用,可使信號(hào)擴(kuò)增一千倍以上,適用于低抗體含量的測(cè)定。
 
  3、直接酶標(biāo)記抗體在篩選出單克隆抗體后可以考慮,但測(cè)定系統(tǒng)的建立需要大量的工作。
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