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血清的質量標準及實際篩選血清方法
點擊次數(shù):973 更新時間:2023-07-10

血清的質量標準:

  1. 內毒素標準為不高于5EU/ml

  2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高偏低都會影響實驗的正常進行

  3. 血紅蛋白標準為不高于20mg/dl

  4. pH。國產(chǎn)血清、大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,根據(jù)PH的高低可用來初步鑒別血清的來源

  5. 微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等,大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾,很難徹di 清除,但對血清質量影響不大。病原性病毒,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,是影響國產(chǎn)血清質量的重要原因之一


在實際篩選時,主要從血清外觀和實驗操作時細胞的生長狀態(tài)進行。

一、從外觀上:

  1. 顏色:根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血,因為胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂;

  2. 澄清度:高質量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡;

  3. 血清沉淀:血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對血清質量沒有影響,沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復凍融密切相關,在實驗操作中可能會對細胞觀察產(chǎn)生影響。

二、從性能上:

  1. 細胞形態(tài),在進行血清篩選時首先觀察細胞的生長形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化,以及觀察貼壁細胞的貼壁情況,細胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現(xiàn)形態(tài)上的差異;

  2. 倍增時間,一般情況下會選擇倍增時間短的血清,值得注意的是血清的影響會傳至5代,在進行測試時,最好培養(yǎng)五代后進行計倍增時間的計算;

  3. 克隆形成率,測試時一般選50、100、200個細胞進行平板克隆測試,平均5d左右換一次液,兩周后染色計數(shù),對比克隆形成情況。



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