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抗體特異性選擇技巧分析
點(diǎn)擊次數(shù):684 更新時(shí)間:2023-10-03

       抗體是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原體的核心,它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)所分泌的一種免疫球蛋白,能夠識(shí)別并結(jié)合特異的病原體抗原,隨后通過(guò)介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來(lái)清除病原體

       特異性(specificity)的本質(zhì)含義是“Connected with one particular thing only"即只與唯yi的特定事物相關(guān),具有專一性。在免疫學(xué)上我們會(huì)說(shuō)“抗體具有特異性",指的就是抗體具有專一性,某一特定的抗體只能與唯yi 一種抗原結(jié)合。其實(shí)準(zhǔn)確來(lái)講是一類具有特定抗原表位的抗原,因?yàn)槟承┎煌目乖哂邢嗤目乖砦唬ǚQ為交叉抗原),也可與同一種抗體特異性結(jié)合??蒲泄ぷ麟x不開(kāi)抗體,WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體,這幾種實(shí)驗(yàn)方法中的抗體特異性選擇需要考慮的要點(diǎn)了解下,特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面:蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。

 

1.蛋白特異性

針對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體,幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分:

a.重組蛋白如果不是全長(zhǎng)表達(dá),則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。

b.內(nèi)源性蛋白好能清楚其剪切與修飾的方式,特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì),并結(jié)合抗體免疫原序列,查看交叉反應(yīng)的情況。

c.磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn),不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在,不宜一概而論。

 

2.種屬特異性

同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異。

a. 目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說(shuō)明書注明的可反應(yīng)種屬信息。

b. 一些稀有種屬很難找到抗體,可以通過(guò)蛋白的序列比對(duì),選擇同源序列免疫的抗體,不過(guò)一般這種情況商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,如果可以申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品,則利于抗體選擇。

 

3.實(shí)驗(yàn)方法特異性

目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多,不同的使用方法過(guò)程中,因?yàn)閷?duì)蛋白樣品的處理方式不一樣,蛋白的含量有差異,對(duì)抗體的識(shí)別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。

 

4.標(biāo)記物的特異性

一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗,比如 WB、IHC 等,都是通過(guò)二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn),可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗,比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測(cè)到的熒光范圍,針對(duì)不通的參數(shù)要求選擇對(duì)應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,需要選配不同的熒光標(biāo)記物。

 



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