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小鼠ELISA檢測試劑盒試驗標(biāo)本收集事項
點擊次數(shù):617 更新時間:2023-10-23
做ELISA實驗,在處理樣本前應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項。
 
  一、標(biāo)本收集注意事項:
 
  1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
 
  2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。
 
  3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
 
  4.標(biāo)本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融。
 
  5.可根據(jù)標(biāo)本的實際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)) 。
 
  6.收集標(biāo)本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復(fù)實驗時標(biāo)本缺失,從而耽誤實驗進(jìn)程。
 
  7.收集標(biāo)本時,應(yīng)該做好防護(hù)措施(比如戴手套,口罩,護(hù)目鏡等),認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險性。
 
  8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。
 
  樣本正確的處理方法應(yīng)該是這樣的:
 
  二、標(biāo)本處理辦法:
 
  1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 
  2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
 
  心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
 
  保存。
 
  3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 
  4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
 
  5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。
 
  注:樣品稀釋的一般原則。
 
  ELISA實驗加樣時可能遇到的問題:
 
  1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)。
 
  2、手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間。
 
  3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外,血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。
 
  ELISA實驗相應(yīng)解決辦法:
 
  1、標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘。
 
  2、標(biāo)本為血漿:須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘。
 
  3、若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
 
  4、加樣后及時放入孵箱。
 
  5、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
 
  6、如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
 
  7、標(biāo)本較多時,請分批操作。


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