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單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研

簡要描述:

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更新時間:2022-01-27

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單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研

產(chǎn)品簡介:

產(chǎn)品名稱:單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研

規(guī)格:48樣 96樣

貨號:AS062

檢測方法:紫外分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類:ASA-GSH循環(huán)系列

貯存溫度:2~8℃。

本試劑盒保質(zhì)期:6個月。本產(chǎn)品僅用于科研實驗。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。23.png

 

所需的儀器和用品:

 

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

Desmocollin 4  橋粒糖4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Follistatin  卵泡抑抗體 規(guī)格: 0.1ml

ASB10  含錨重復序列-細胞因子信號抑制物盒家族10抗體 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

SDCG1  清學定義結(jié)腸抗原1抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-FGFR1 (Tyr766)  磷化性成纖維細胞生因子受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-p57 Kip2 (Thr310)  磷化周期依賴激抑制因子1C抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mucin 4/Muc4  粘-4抗體 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold  膠體金標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 2ml

CNTN4/AXCAM  軸突相關粘附分子抗體 規(guī)格: 0.2mlSalmonella enteritidis H  傷寒沙門氏菌鞭毛抗原H抗體 規(guī)格: 0.2ml

PKA regulatory subunit I beta  激受體相關1β抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PRKAA2(Ser173)  單磷活化激α2抗體 規(guī)格: 0.1mlMARCH1  膜相關環(huán)指1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-Goat IgG/Bio  標記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

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操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

 


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