日本亚洲洲精品码无无专区,丰满人妻熟妇乱又伦精品软件 ,妻子的秘密免费读全文,夜夜精品无码一区二区三区

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁 > 技術(shù)與支持 > 活性蛋白試劑盒提取操作步驟
活性蛋白試劑盒提取操作步驟
點擊次數(shù):969 更新時間:2022-04-19

本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞中提取具有活性的全蛋白, 用含有蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液

Lysis Buffer 勻漿裂解組織或細胞,作用溫和,提取過程簡便。獲得的全蛋白可用于 Western Blot、免疫共沉淀和酶 的活性的測定的等后續(xù)研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究,因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。 應用方面:可用于 Western Blot、免疫共沉淀和酶活性測定等后續(xù)研究。

操作步驟

Ⅰ、實體組織蛋白的提取

1、在每 mL 冷 Lysis Buffer 加入 10 μL 磷酸酶抑制劑,1 μL 蛋白酶抑制劑和 10μL PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待 用;

2、 每 100mg 固體組織置于培養(yǎng)皿中,手術(shù)剪剪碎成 3mm×3mm 左右的小塊,加入 0.5~1 mL 冷 Lysis Buffer,玻 璃勻漿器上下手動勻漿 15 次,注意低溫操作;

3、取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 預冷的離心管,離心 10000 轉(zhuǎn)/分,4℃離心 5 min;

4、取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford 法、BCA 法);

5、分裝保存于-70℃,避免反復凍融。


Ⅱ、培養(yǎng)細胞蛋白提取

1、 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入 10mL/150mm 培養(yǎng)板的冷 PBS 洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;

2、  懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,1000 轉(zhuǎn)/分離心 10 min,再用10mL/150mm 培養(yǎng)板的冷 PBS,1000 轉(zhuǎn)/分離心 5 min 洗兩次;

3、 在每 mL 冷 Lysis Buffer 加入 10μL 磷酸酶抑制劑,1μL 蛋白酶抑制劑和 10μL PMSF(用戶自配:濃度 100mM, 溶于異丙醇),混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用;

4、 在上述培養(yǎng)板或離心管的細胞中,加入上述配制好的冷 Lysis Buffer;

5、冷室或冰上操作,貼壁細胞用細胞刮子刮下,皆 Lysis Buffer 一同轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中;懸浮培養(yǎng)或裂解前刮下的貼壁細胞皆 Lysis Buffer 一同轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中;

6、置于 4℃搖床平臺上,溫和振蕩 15 min;

7、14,000rpm,4℃離心 15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford 法、BCA 法);

8、  分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

注意事項:

所有接觸樣品的用具及試劑均需預冷。我們在提取蛋白后,如有必要,可透析除去表面活性劑。


欧美日韩精品视频一区二区| 成全动漫视频在线观看免费高清 | 亚洲av夜夜欢一区二区三区| 亚洲国产精品自产在线播放| 永久免费无代码开发平台网站| 欧美大胆a级视频免费| 国产在线一区二区三区AV| 最近韩国日本免费观看免费| 破了亲妺妺的处免费视频国产| 全免费a级毛片免费看无码| 国产无线乱码一区二三区| 丰满少妇高潮惨叫久久久| 欧美毛片免费观看| 99久久麻豆AV色婷婷综合| 又大又粗又爽a级毛片免费看| 蜜桃麻豆WWW久久囤产精品| 人妻互换共享4p闺蜜疯狂互换| 久久久久人妻精品一区三寸蜜桃| 免费看韩国黄a片在线观看| 国产精品点击进入在线影院高清| 亚洲av成人片无码| 亚洲第一极品精品无码久久| 免费a级毛片18禁网站app| 亚洲精品v天堂中文字幕| 精品国模一区二区三区| 日本人妻丰满熟妇久久久久久| 久久亚洲欧美国产精品 | 人妻~夫の上司犯感との| 一区二区三区在线 | 欧| 东京热人妻系列无码专区| 少妇极品熟妇人妻无码| 久久久精品欧美一区二区三区| 久久久精品456亚洲影院| 欧洲精品一卡2卡三卡4卡影视| 永久免费av无码网站韩国毛片| 亚洲av无码乱码在线观看富二代| 亚洲国产成人精品无码区在线网站| 免费无码a片一区二区三区| 欧美深度肠交惨叫| 欧洲精品99网yours| 亚洲精品乱码久久久久久|