日本亚洲洲精品码无无专区,丰满人妻熟妇乱又伦精品软件 ,妻子的秘密免费读全文,夜夜精品无码一区二区三区

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁 > 技術(shù)與支持 > 原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟
原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟
點(diǎn)擊次數(shù):1420 更新時(shí)間:2022-04-24

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟:

1、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

2、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

3、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

4、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。

5、大腦皮質(zhì)放于DMEM中(含慶大霉素和谷氨酰胺 ),剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

6、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

7、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

8、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

9、沉淀加入2ml DMEM(含慶大霉素和谷氨酰胺)培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

10、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM*培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。


日韩精品视频一区二区三区| 国产欧美综合系列在线| 中文字幕人妻无码乱精品| 一本大道伊人AV久久综合| 精品成A人无码亚洲成A按摩| 久久亚洲精品成人AV无码网站 | 18禁无遮挡无码网站免费 | 欧美亚洲色综久久精品国产| 亚洲人成在线观看| a片做爰片仑理片免费看午夜蝴蝶| 亚洲成av人综合在线观看| 国产欧美va欧美va在线观看| 色情欧美片午夜国产特黄| 人妻少妇精品中文字幕av| 初尝人妻少妇中文字幕| 欧美最猛黑人XXXX黑人猛交| 日韩加勒比一本无码精品| 护士人妻hd中文字幕| 国产成人精品综合久久久| 乱公和我做爽死我视频免费| 亚洲av无码国产一区二区| 人妻免费久久久久久久了| 99精品国产99久久久久久97| 韩国精品无码一区二区三区| 精品国产污污免费网站AⅤ| 亚洲熟妇少妇任你躁在线观看无码 | 久久亚洲精精品中文字幕早川雨理 | 亚洲熟女www一区二区三区| 免费a级毛片无码| 精品国产伦一区二区三区在线| 和少妇人妻邻居做爰无码| 国内揄拍国内精品少妇国语| 桃花免费高清在线观看视频| 亚洲熟妇av一区| 亚洲国产精品久久久久秋霞影院| 疯狂做受xxxx高潮欧美日本| 久久99精品国产麻豆婷婷| 精品乱码一区二区三区四区| 欧美国产成人精品二区芒果视频| 国内精品九九久久久精品| 国99精品无码一区二区三区|